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有關 TechComm 整體 我有比較急切的一般性問題，應該找誰洽詢？ 請打 3366-9680 馬上問。 我有比較嚴肅的管理問題想申訴，應該找誰？ 請直接寫 e-mail 給中心主任 yichun@ntu.edu.tw 優先保密處理。 我能否在 TechComm 使用配給醫學卓越研究中心的 20 萬元補助款？ 有關 TC1 基因體及轉錄體 有關 TC3 蛋白質體學 預定進行 MALDI-TOF 或 ESI-MS/MS 的樣品應如何處理？ 有關 TC4 免疫學工具 有關 TC5 生物影像工具 有關 TCX
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(1) TC 有提供 RNA 抽取的代工服務嗎？ [Back] Ans RNA 的抽取方式 ，會依照生物材料之情況而有差別，歡迎多與技術員討論，提供技術上的諮詢協助，但無法直接代工。 (2) 為甚麼送件前需先進行 RNA 品質檢測？ [Back] Ans 因為 RNA 的品質會影響後續 microarray 結果的準確度，若 RNA 品質不佳，結果的可信度是會令人存疑的，而送件樣品 RNA 的品質及要求請盡量符合 注意事項。 Ans RNA 的品質大致可分為純度及完整度： 純度 (purity)： 使用分光光度計所測得的 A260/A280 之吸光值比值。其中，A260 為核酸濃度計算的依據， 而 A280 則是代表蛋白質吸光度。 一個純度高的 RNA 其比值應在 1.9~2.1 之間。 完整度 (integrity)：目前可利用電泳分析法或 Agilent 2100 Bioanalyzer 進行檢測。 其中，將 total RNA 進行 0.8％ denaturing agarose gel 電泳分析中所得到的結果如下圖所示：
(a) 品質良好的 RNA 可觀察到分別由 18S 及 28S (真核生物) 所構成的兩清晰條帶，其亮度的比值：28S/18S 應接近 2。 (b) RNA 因 RNase 分解或其他因素產生降解，則會出現模糊以及 28S/18S 比值過低的情況。 Ans 非國定例假日 8:30~12:00 下午 13:30~17:00。 Ans 請撥 3366-9680 湯凱鈞先生。登記時段有重疊時，依照使用者來電順序排定。 (6) TCX 如何收費？ 非生科院人士能否使用？ [Back] Ans TCX 收費方案尚在研議中，目前仍未正式收費，但使用者將依使用次數，依照比例分擔維修 (或合約) 費用。 TechComm 所有服務，原則上僅供本院師生使用，但目前已經逐步開放給校內同仁使用。 (未來規劃) Ans 目前本平台提供：(1) 小白鼠傳統抗血清、(2) 大白兔傳統抗血清 、(3) 雞 IgY 免疫球蛋白、(4) 單株抗體四項服務。若需要製備蛋白質體抗體庫，因工程浩大，需要特別提出申請。 Ans 本平台接受的抗原種類有：(1) 純化蛋白質、(2) 表現蛋白質、(3) 已接上 carrier 或以 MAPs 方式合成之 peptides、(4) 已接上 carrier 的小分子。一般抗原都以溶液形式，但也接受由電泳膠體上切下來，或轉印到轉印膜的抗原。 Ans 免疫注射每隻小鼠每次需 50~100 mg 抗原，視狀況需注射 5~8 次，每次 3~5 隻，因此委託者至少須提供 3~5 mg 抗原。 抗原純度越高越好，委託者需自行純化，本平台或 TC3 可提供協助。本平台以蛋白質電泳評估抗原純度，蛋白質越純越好，最好是單一色帶 (尤其是製備傳統抗血清者)。 Ans 抗原的品質是抗體製備的關鍵，為增加成功率，委託者須提供以下資訊： 1. 抗原純化的流程，以評估是否含高鹽 (NaCl) 或對生物致命的成分 (如 sodium azide)。 2. 表現蛋白質的生物來源，避免與免疫動物之親緣關係太過相近。 3. 合成 peptides 之序列請自行設計 (本平台可提供諮詢)，純度必須以 HPLC 分析確認。 Ans 使用者可自行提供協助人力，進行免疫注射及抗體篩選之 ELISA 工作，我們可安排操作訓練。細胞培養相關操作，因顧及污染控管，除非熟悉無菌操作並獲平台主持人認可，目前皆不得進入操作，只能由本平台技術人員操作。若想學習單株抗體製備技術，可選修相關課程 (免疫學技術)。使用者能否自行操作，將由本實驗室主持人判定。 (12) 可否借用 TechComm 的會議室？ [Back] Ans TechComm 會議室除供中心行政會議、舉辦學術研討會、講習會之外，也歡迎經由本院國際交流中心接待外賓，詳細規則請見管理規則 [TC003] 並與中心人員接洽。然而對各研究室的例行實驗進度報告，學生書報討論等活動，則恕不出借。 (13) 進行 2-DE 分析的蛋白質樣品該如何處理？ [Back] Ans 進行 2-DE 分析的蛋白質樣品，通常先以沉澱方式萃取，以除去雜質，之後再將沉澱樣品回溶。常見的沉澱方法如 acetone, TCA/acetone, phenol, phenol/chloroform/isoamyl alcohol 等。不同沉澱方法適合不同種類的蛋白質樣品，需要參考文獻或是經由實驗測試，才能決定合適之處理方式。本平台可提供討論諮詢空間，與使用者討論如何找到最適合其樣品的處理方法。 (14) 一次 2-DE 分析需要多少量的蛋白質？ [Back] Ans 依據膠條性質、長度及染色方法不同，分別有其最適 loading 量 (參照下表)，SYPRO Ruby 染色可比照 silver staining。然而蛋白質樣品在沉澱萃取的過程中，一定會有損失，必須將此損失量估計在內。
2-D Electrophoresis, Principles and Methods , Tom Berkelman and Tirra Stenstedt (15) 預定進行 N-端定序的樣品需要如何處理？ [Back] Ans 請參考 TC3-A40 使用注意事項。 (16) 預定進行 MALDI-TOF 或 ESI-MS/MS 的樣品應如何處理？ [Back] Ans 樣本的準備方法： 1. 本平台可提供 in gel digestion 操作 。 2. 樣本濃度越高越好，Coomassie Blue 染色能清楚看到的色點，結果會較明確。然而 SYPRO Ruby 染色能清楚看到的色點，蛋白質量低，故較不易有明顯的結果。 3. 最好的樣本是 2-DE 上的單一色點，若是使用一次元電泳，就要小心避免污染，電泳前儘量以各種色層分析法預先純化，以確保蛋白質之純度。 4. 本平台目前 MALDI-TOF 或 ESI-MS/MS 均委託廠商代為操作，而經 TechComm 送出之樣品可獲優惠價格。 (17) TechComm 與通常熟知的『貴重儀器中心』有何不同？ [Back] Ans 是有點不一樣。通常儀器中心只提供單點的儀器服務，譬如說使用某種分析儀器；但是 TC 除了提供如此的儀器之外，也關心使用者整個研究的上中下游相關實驗，希望能夠提供一個全面性的流程 (技術平台概念)，而不只是單點服務，這可由各平台網頁上的『服務流程』看出來。雖然各平台不一定完全設備有理想中的所有儀器，但平台技術人員會盡力協助使用者完成整個流程實驗，甚至介紹到別的儀器中心，或者可靠的商業服務。 (18) 影像平台目前提供人力協助的服務為何？ [Back] Ans 因本平台儀器種類繁多但人力有限，技術人員無法每項儀器皆幫忙操作，目前主要在使用兩台共軛焦顯微鏡，以及兩台電子顯微鏡時提供人員服務；其餘使用樣品前處理儀器者，希望有曾使用過或修習過相關課程，可以自行操作者為佳。本平台備有標準操作流程 (standard operation process, SOP)，且技術人員依然會提供協助及簡單示範，有任何疑慮可電 (02) 3366-2498 洽詢。 (19) 使用共軛焦顯微鏡之前樣品該如何處理？ [Back] Ans 螢光染色或自發螢光 共軛焦顯微鏡主要是用來觀察螢光樣品，故無論使用何種材料，皆須讓其帶有螢光。可用化學染色或免疫染色的方式接上螢光物質，基因轉植讓生物細胞自製螢光，或本身用雷射激發就會有自發螢光的材料皆可。 玻片製作 原則上最容易觀察的方式是將材料製作成玻片，用 0.17 mm 厚度的蓋玻片蓋上並且仔細封片。太厚的樣品要考慮雷射的穿透能力，請先行使用切片機或徒手切薄，以利觀察。若為特殊材料或活體樣品無法封片，請先來電洽詢 (02) 3366-2498。 初步觀察 我們強烈建議使用者在預約使用共軛焦顯微鏡之前，先行使用一般螢光顯微鏡檢查樣品是否會發螢光。並請記得樣品的大小 (或使用的物鏡倍率)，以及螢光物質的激發光波長 (excitation) 和發射光波長範圍 (emission)，告知技術人員以便操作。 Ans 當某種物質經由特定波長的入射光照射，吸收光能達到激發狀態 (excited states)，在失去少許的能量之後，發散出比入射光波長更長的發射光，具有此種性質的發射光就稱之為螢光。
Ans 最主要的差異，在於共軛焦顯微鏡在發射螢光的焦點上，放置一個針孔 (pinhole)，後面是一個接受光訊號的光電倍增管 (photomultiplier tube, PMT)，因此任何在樣品對焦平面以外的螢光，會被針孔擋住，不會出現在畫面裡。其意義是可以得到樣品連續對焦平面的光學切片，組合成 3D 立體結構，加上其他光學路徑的改善，影像更加清晰。詳細原理請參考 美嘉儀器公司共軛焦顯微鏡 以及 How does a confocal microscope work? (22) 常用於 in gel digestion 的酵素有哪些？ [Back] Ans 常用的酵素包括 trypsin, V8, Lys-C 等，可依據蛋白質上酵素切點多寡，選擇適合的酵素。如果遇到分子量較大的蛋白質，可以同時使用兩種以上酵素進行 digestion。
Note (1) B: Asx aspartic acid or asparagine (2) Z: Glx glutamic acid or glutamine (or substances such as 4-carboxyglutamic acid and 5-oxoproline that yield glutamic acid on acid hydrolysis of peptides) Source: http://www.matrixscience.com/help/search_field_help.html Ans 非常歡迎各實驗室組隊參觀 TechComm，請連絡 TC Manager (3366 9680)。 時間︰全程大約 1 hr，最好在一週前預約，緊急安排要看是否有其他活動衝突。 人數︰最多 12 人 (勉強可到 15 人)，最少 6 人，歡迎各實驗室組團參加。外賓參觀不在此限 (英文簡報請預先告知)。 行程︰歡迎 (5 min) - 簡報 (10 min) - 參觀四樓生物影像 (15 min) - 參觀 TC 本部 (15 min) - 護照及自由討論 (10 min) (簡短版 30 min 行程只包含上面 underlined 部份節目) Ans 請撥 3366-9680，找湯凱鈞。 (25) 是否有計畫無法用臺大開立的收據核銷？ [Back] Ans 若是計畫內有編列儀器使用費，應都可核銷。 (26) 不方便繳交現金的話，還有哪些付款方式？ [Back]
Ans
(1)
繳交即期支票，抬頭為
｢國立臺灣大學｣，收據上將備註票號。 (27) 金額超過一萬元時，TechComm 能提供估價單嗎？ [Back] Ans 會計室審核組認定繳費明細即可代替估價單，但仍可製發估價單。 (28) 若非用本校的經費付款，可否提供 ｢國立臺灣大學｣ 以外的繳款人抬頭？ [Back] Ans 可以，但請務必向您的計畫主持人或付款人確認後，於繳款前先與 TechComm 聯絡，確認收據抬頭及統一編號。 (29) 使用線上繳費系統時，收費帳戶名稱及繳費 ID 要如何選定？ [Back] Ans 收費帳戶名稱選擇 ｢961637 生命科學院科技共同空間｣，繳費 ID 預設為您實驗室的電話號碼。 Ans 繳費單收執聯、身份證明文件 (學生證或助理證)。 |
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2017/10/18 |
