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Initial cell density

Measurement of Growth in Suspension Culture

取懸浮細胞10 ml（取細胞時整個培養瓶之細胞濃度需均值），將樣本置入15 ml 並劃有刻度之離心管，以 1000 g 離心 5 分鐘。其細胞之濃度單位為：沈澱之細胞（ml）/ 10 ml。

Viability of Culture Cell

細胞活力對培養之細胞影響很大，細胞之活力可以利用顯微鏡觀察經處理與未經處理之細胞差異來判斷，或是使用化學染色法來判斷。

此測試之目標在於細胞之呼吸作用能力，利用2,3,5-triphenyltetrazolium（TTC）經細胞呼吸作用後會將 TTC 還原成紅色染劑，此染劑可被萃取出並於分光光度計下進行計算。

FDA 方法為一種快速鑑定細胞活力之方法，將 0.5%（w/v）FDA之丙酮溶液儲存於 0 ℃下以備使用。活力鑑定時將 FDA 溶液適量滴入欲測試之細胞團中，FDA 本為非螢光且非極性物質，但經具活力之細胞吸收後，會因活細胞內之酯脢（Esterase）作用後裂解並釋出具螢光之物質，故於處理約 5 分鐘後將細胞置於顯微鏡下以 UV 照射會有綠色螢光現象，而無活力之細胞則無螢光發生現象。

此為與 FDA 相反之方法，將 0.025%（w/v）之 Evan blue 水溶液，適量滴入測試之細胞團，死亡或受傷之細胞會受染色，而具活力之細胞則會排除染劑並呈無被染色狀態。




細胞懸浮培養為一種大量增殖細胞之方法，即將處與生長停止期（Stationary phase）之細胞繼代培養（Subculture）至新鮮之液態培養基，如此不斷地從複，一乘十，十乘百，如此可在短時間獲得大量之懸浮細胞。何時進行繼代培養是很重要的關鍵，此即如何判定細胞於何時是處於停滯期之生長階段，通常可以下列要點判斷：
	Initial cell density	細胞濃度之差異多取決於懸浮細胞培養類型，一開始接種之細胞濃度低則會延長細胞生長之停滯期（Lag phase）與指數生長期（Exponential phase），所以在懸浮培養進行之前，需要先決定繼代細胞之濃度，選擇最適之濃度，如此才能達到最大生長量。
	Duration of lag phase	影響停滯期之時間長短因素很多，常見的如繼代之細胞濃度、培養環境、繼代之重複次數等。總而言之，停滯期就如同細胞對新環境之適應期般，當新環境能滿足細胞生長之代謝條件時，細胞才能進行生長。
	Growth rate of cell line	細胞生長曲線為重複試驗所得之結果，對某一植物其某一部位所取得之細胞，在各條件因子不變之下進行培養，重複試驗多次所取得之結果，將結果畫成一曲線，此曲線可視為這類型細胞及培養方式之細胞生長標準曲線，如此可供研究者決定繼代培養之時期。

Measurement of Growth in Suspension Culture
	Cell Counting	細胞計算是相當精確之細胞生長估算法。細胞數目之增加速度由懸浮細胞之有絲分裂指數（Mitotic index）所決定，確定細胞之數目雖然簡單，但卻是相當令人厭煩的工作。懸浮培養通常具有各種不同大小之細胞絮聚體（Cell aggregates），為使這些絮聚體分解可以5 - 15 % Chromic acid 或 Pectinase（0.1 % w/v，pH 3.5）處理，計算 1 體積之懸浮細胞，需要大約 2 體積之 8 % Chromic acid 溶液，將兩者混合後於 70 ℃ 熱處理 2-15 分鐘，溶液冷卻後置於震盪器震盪約 10 分鐘，之後再進行離心，將 Chromic acid 倒出並以 8% NaCl 重複洗滌細胞團，10 - 15 分鐘後將分散之細胞置於血求計數器（Haemocytometer）計算。
	Packed Cell Volume	取懸浮細胞10 ml（取細胞時整個培養瓶之細胞濃度需均值），將樣本置入15 ml 並劃有刻度之離心管，以 1000 g 離心 5 分鐘。其細胞之濃度單位為：沈澱之細胞（ml）/ 10 ml。
	Cell Fresh Weight	將細胞過濾多餘之水分後置於秤盤上，秤其鮮重。
	Cell Dry Weight	將細胞過濾多餘水分後，置入乾燥爐，以 60 ℃ 熱烘 12 小時，待冷卻後置於秤盤上秤重。

Viability of Culture Cell
細胞活力對培養之細胞影響很大，細胞之活力可以利用顯微鏡觀察經處理與未經處理之細胞差異來判斷，或是使用化學染色法來判斷。
細胞活力對培養之細胞影響很大，細胞之活力可以利用顯微鏡觀察經處理與未經處理之細胞差異來判斷，或是使用化學染色法來判斷。

	Microscopy		細胞質流及健康之細胞核是否存在都是判斷細胞活力之依據。
	Reduction of Tetrazolium Salts		此測試之目標在於細胞之呼吸作用能力，利用2,3,5-triphenyltetrazolium（TTC）經細胞呼吸作用後會將 TTC 還原成紅色染劑，此染劑可被萃取出並於分光光度計下進行計算。
	Fluorescein Diacetate（FDA） Method		FDA 方法為一種快速鑑定細胞活力之方法，將 0.5%（w/v）FDA之丙酮溶液儲存於 0 ℃下以備使用。活力鑑定時將 FDA 溶液適量滴入欲測試之細胞團中，FDA 本為非螢光且非極性物質，但經具活力之細胞吸收後，會因活細胞內之酯脢（Esterase）作用後裂解並釋出具螢光之物質，故於處理約 5 分鐘後將細胞置於顯微鏡下以 UV 照射會有綠色螢光現象，而無活力之細胞則無螢光發生現象。
	Evan Blue Staining		此為與 FDA 相反之方法，將 0.025%（w/v）之 Evan blue 水溶液，適量滴入測試之細胞團，死亡或受傷之細胞會受染色，而具活力之細胞則會排除染劑並呈無被染色狀態。